AFT 游离DNA提取试剂盒

产品名称                  单位       货号

AFT CWhipro Circulating NuGLeic Acid Kit    50T     AFT2074-01

【储存条件】

Proteinase K于-20度保存，磁珠4度保存，其余试剂常温保存

【试剂盒组分】

Component                    50T   

 Buffer GL                         15 ml            

Buffer WB1 (concentrate)          13 ml           

Buffer WB2 (concentrate)          15 ml            

Buffer EB                        10 ml      

Proteinase K                     1 ml

Beads                           1.1ml

【产品简介】

本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、淋巴液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的磁珠和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与磁珠结合，在低盐、高pH值时游离DNA从磁珠上洗脱下来。纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制物，游离DNA得率与样品的类型，储存条件、时间以及个体差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

【自备试剂】

  无水乙醇。

【实验前准备及注意事项】

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取量下降。

2．使用前请检查Buffer GL、Buffer WB1是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请于58˚C水浴孵育重新溶解。

3．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明先在Buffer WB1和Buffer WB2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。

4．实验开始前请将水浴锅预热至60˚C。

5．可将洗脱缓冲液Buffer EB预热至60˚C后使用。

【操作步骤】

1. 向离心管（自备）中加入20μl Proteinase K。

2．加入200μl血清/血浆样本。

注意：当样品量超过200μl时，请等比例增加Proteinase K和Buffer GL试剂用量。

3. 加入200μl Buffer GL，颠倒混匀，剧烈震荡混匀。

4．56˚C孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。

5．加入20ul磁珠和200μl 无水乙醇，室温放置5 min，期间混匀几次。

6．将离心管置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，吸弃液体。

7. 将离心管从磁力架上取下，加500ul Buffer WB1，旋涡充分混匀30 s。

注意：Buffer WB1是浓缩液，按说明书添加乙醇后再用，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。

8. 将离心管置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，吸弃液体。

9. 将离心管从磁力架上取下，加600 ul Buffer WB2，旋涡充分混匀30 s。

注意：Buffer WB2在使用前按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防乙醇挥发。

10. 将离心管置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，吸弃液体。

注意：如要求纯度更高，可再用Buffer WB2清洗一次。

11. 将离心管置于磁力架上，开盖室温放置5-10min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度，以免DNA难以洗脱。

12. 将离心管从磁力架上取下，加入30 ~ 50 ul Buffer EB，充分震荡1-2 min。

13. 将离心管置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心将溶液转移至新的离心管中，并于适当条件保存。

注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间。