AFT Gel Extraction Kit (with column)（胶回收试剂盒）

说明书下载

【储存条件】

常温运输，室温（15~30˚C）保存，保质期一年。如需长期保存，可将各试剂组分置于 2~8˚C，使用时如发现结晶，可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C保存，否则可能影响吸附效率。

【产品简介】

AFT胶回收试剂盒利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理，配备AFT自主研发的膜结合液（又称溶胶液）和高性能的硅胶膜离心吸附柱，可在 15 分钟内清除凝胶、核酸染料及其他杂质，高效回收 DNA 片段。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20µg，对 100 bp~10 kb 线性双链 DNA 片段的回收效率可高达50~90%，也可用于单链 DNA 片段和质粒 DNA 的纯化。因回收率受 DNA 片段大小、浓度等因素的综合影响，故应尽量加大电泳的 DNA 片段浓度，以提高回收率。回收后的 DNA 片段可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。

【回收效率】

线性 DNA 片段大小          回收效率

50 bp                  30~50%

100 bp ~ 200 bp              50~70%

200 bp ~ 5 kb              70~90%

5 kb ~ 10 kb               50~70%

【产品组份】

50T                              注意事项

膜结合液（MB）        25ml                     

膜漂洗液（MW）       15ml                  初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀

洗脱缓冲液（EB）      10ml       

平衡液（BL）          25ml                     请使用当天平衡液处理过的吸附柱

离心吸附柱及收集管     50套                           室温密闭干燥保存

初次使用本试剂盒，请按瓶标说明向膜漂洗液（MW）中加入相应体积的无水乙醇（用户自备），并在试剂瓶上做标记。

【实验准备】用户需自行准备的材料：含 DNA 样品的琼脂糖凝胶，无水乙醇，异丙醇， 55ºC 水浴，切胶设备，台式离心机。

【操作步骤】

柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入400 μl的平衡液BL，12,000 rpm (-13,400×g ) 离心1 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

（请大家别嫌这步麻烦，它是为了盒子放置时间长不用，处理一下效果如新，减少浪费。如果新开封马上用，可以不做柱平衡）

1. 切胶。用干净刀片将目的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶。

注意：紫外线对DNA片段有损坏作用，切胶要迅速，避免长时间照射，同时做好眼睛及皮肤的防护。

2. 称重。将切下的含有目的DNA条带的凝胶切成小块，放入1.5 ml塑料离心管中，称重。

注意：先称一个空的1.5 ml塑料离心管的重量，然后放入凝胶块再称一次，两次重量相减得到凝胶的重量。

3. 溶胶。加入等体积膜结合液（MB），60℃水浴，每隔2 ~ 3 min上下振荡，直到凝胶完全溶解。

注意：如凝胶重量为100 mg，其体积可视为100 ul，则加入100 ul膜结合液；如凝胶浓度大于2%，所用膜结合液体积加倍；对于回收<300 bp的小片段或者大于3000bp的大片段，必须在凝胶完全溶解后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。

4. 吸附。待溶液冷却后加入离心吸附柱中，室温静置2 min，让DNA片段与吸附柱中的硅胶膜充分结合，然后12,000 rpm离心1 min，弃收集管中滤液。

注意：如总体积超过750 ul可分2次将溶液加入同一离心吸附柱中；为增加目的DNA片段的洗脱浓度，也可将多管溶胶液加入到同一离心吸附柱中。

5. 清洗。加入600 ul的膜漂洗液（MW），12,000 rpm离心1 min，弃收集管中废液。

注意：膜漂洗液（MW）按要求加入乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发; 如后续实验要求纯度较高，可再清洗一次。

6. 干燥。将离心吸附柱于12,000 rpm离心2 min，甩干残留漂洗液。

注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续实验。

7. 洗脱。将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管中，在吸附柱中央加入30 ~ 50 ul洗脱缓冲液（EB），室温放置2 min。12,000 rpm离心1 min收集DNA片段。

注意：为增加回收效率，可将洗脱液在60℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 ~ 8.5之间）。

【常见问题及解决方案】