M5 Hiper PCR & DNA Fragment Purification Kit（PCR片段纯化试剂盒）

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【储存条件】

常温运输，室温（15~30˚C）保存，保质期一年。如需长期保存，可将各试剂组分置于 2~8˚C，使用时如发现结晶，可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C保存，否则可能影响吸附效率。

【产品简介】

AFT快速 DNA 胶回收试剂盒利用利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理，配备AFT自主研发的膜结合液（又称溶胶液）和高性能的硅胶膜离心吸附柱，用于纯化 PCR 反应产物或其他酶促反应体系中的蛋白质、残留 dNTP、引物、盐分等其他杂质，对引物二聚体的清除率在 70%以上。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg，对 100 bp~10 kb 线性 DNA 片段的回收效率可高达 95％，也可应用于 20 kb 以下环形质粒的脱盐纯化。整个操作可在 10 分钟内完成，快速、简便。回收后的 DNA 可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。

【回收效率】

线性 DNA 片段大小          回收效率

50 bp                  30~50%

100 bp ~ 200 bp              50~70%

200 bp ~ 5 kb              70~90%

5 kb ~ 10 kb               50~70%

【产品组份】

50T                            注意事项

膜结合液（MB）        25ml                   

膜漂洗液（MW）       15ml              初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀

洗脱缓冲液（EB）      10ml       

离心吸附柱及收集管     50套                       室温密闭干燥保存                 

初次使用本试剂盒，请按瓶标说明向膜漂洗液（MW）中加入相应体积的无水乙醇（用户自备），并在试剂瓶上做标记。

【实验准备】

用户需自行准备的材料：无水乙醇，异丙醇，台式离心机。

【操作步骤】

1. DNA 结合：按每 1 μl DNA 样品加入 1 μl 膜结合液（MB）的比例（1:1）加入膜结合液，混匀后转移到插入收集管的离心吸附柱内，室温静置 1 分钟，室温下≥12,000 x g 离心 1 分钟，弃除收集管中的废液，将离心吸附柱重新插回收集管中。

离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg，每次最多可离心 950 μl 溶液，如溶液体积大于 950 μl，可分批转移到同一吸附柱内，分次离心；若样品体积低于 50 μl，可用灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液（EB）补足至 50 μl，再加入 50 μl 的膜结合液（MB）。为增加小片段的回收效率，当回收的 DNA片段小于 300 bp 时，或大于3000bp时，可加入 1：1 体积的异丙醇。

2．清洗：加入 700 μl 膜漂洗液（MW，请确认已加入无水乙醇）于离心吸附柱中，室温下≥12, 000 x g 离心 30 秒，弃除收集管中的废液，将离心吸附柱重新插回收集管中。

3．再次清洗：加入 500 μl 膜漂洗液（MW）于离心吸附柱中，重复离心一次。弃除废液后，将离心吸附柱去盖再次离心 1 分钟，彻底去除残余漂洗液。

4．洗脱：小心取出离心吸附柱，将其套入一个新的 1.5 ml 灭菌离心管中。向硅胶吸附膜的中央加入 30 μl 洗脱缓冲液（EB），室温静置 1 分钟后，≥12,000 x g 离心 1 分钟收集纯化的 DNA 片段。

为提高回收片段浓度，离心收集后可将洗脱后的溶液再次加入离心吸附柱中重复洗脱一次，可提高约 20%的产量；如必须使用无菌去离子水洗脱，需注意其 pH 值是否接近中性，否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调节至 7.0~8.5 之间。

5．储存：弃除离心吸附柱，获得的 DNA 片段可直接用于后续反应或于-20℃长期保存。

【常见问题及解决方案】