【储存条件】
在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液II产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A后的Solution I 应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
【产品简介】
本试剂盒利用多彩的颜色变化，监控质粒提取的每步过程，让实验变得高效并轻松有趣。本试剂盒用于高纯度质粒DNA的小量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。通过清洗液的洗涤可去除杂质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到高达20 ug纯度较高的质粒DNA。使用本试剂盒每次可处理1 ~ 4 ml过夜培养的菌液，可在8 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序等各种分子生物学实验。
【产品组份】
试剂盒成分 | AFT2015-01 |
Solution I | 15 ml |
Solution II | 15 ml |
Solution IV | 20 ml |
Buffer WB2按要求在Buffer WB2中加入无水乙醇 | 15 ml |
Buffer EB | 10 ml |
RNase A (10 mg/ml) | 150 ul |
MiniSpin Column With Collection Tubes | 50套 |
（注意：使用前将全部RNase A溶液加到Solution I中混合均匀，2 - 8℃保存）
【产品特点】
1. 快捷、高效：操作简便，得率高，节约时间。
2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净。
3. 含有指示剂，可直观判断操作过程中样本裂解程度。
【注意事项】
1. 细菌培养时间一般为12 ~ 16 小时（用锥形瓶或者试管摇菌，留够足够的空间让细菌接触空气，利于细菌生长），如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变。
2. 注意溶液I，II和 IV的用量比例，若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。
3. 随菌体增多应延长Solution II的作用时间，直至溶液成粘稠透明状，但时间过长会导致质粒DNA 变性。
4. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
5. 纯化的质粒在电泳中表现为2 ~ 3 条带有时甚至为4 ~ 6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。
【操作步骤】
1. 取1 ~ 4 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1.5 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）
2. 加入250 ul Solution I，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀浑浊的棕红色。
（注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）
3. 加入250 ul Solution II，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。
（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染，如未完全变得清亮，可能是菌体太多，可增加Solution II的用量，在后续的操作中Solution IV的用量也要相应增加）
4. 加入350 ul Solution IV，立即颠倒混匀，可见红黄相间的沉淀物产生，继续混匀直到完全变为黄色，然后12,000 rpm离心2 min。
（注意：Solution IV加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色）
5. 将上清液倒入到离心吸附柱中，12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。
6. 加入500 ul Buffer WB2，室温12,000 rpm离心2 min，弃收集管中滤液。
注意：Buffer WB 2为浓缩液，初次使用按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发。
7. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，加入50 ~ 100 ul的洗脱液Buffer EB，12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即质粒DNA。
