【储存条件】 2-8℃储存，保质期两年。不可冷冻！！！
【产品简介】
AFT Lipo9000 Transfection Reagent是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染，对难转染细胞表现出更大优势（效率显著高于目前主流转染试剂）。已经成功转染过的细胞系：HeLa、HEK293T、293T、HUVEC、HepG2、HEK293、CNE2、SW480、HEK293FT、HT29、Raw264.7、THP-1、HCT116。
【产品特性】
1）细胞毒性低，转染后可不换液，也可在4-6小时后更换新鲜培养基。
2）对高密度细胞保持高转染效率，在细胞密度90%以上仍具有很高的转染效率，细胞高密度转染有利于提升蛋白整体表达量，或增大检测信号，并减少转染试剂对细胞的伤害。
3）血清不影响转染效率。可将转染复合物直接加入完全培养基中，可减少去除血清对细胞的损伤。
4）用量少。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1-2 μL，1 mL可做500-1000 次转染；对于6孔板，每次用4-8 μL，1 mL约可做125 -250次转染。
【注意事项】
1）可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
2）高细胞密度仍具高转染效率，建议细胞密度大于90%，有利获得更高的蛋白表达。
3）铺板时可使用抗生素，但转染时应换液将抗生素移除。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，内毒素是转染的大敌（建议用AFT2017质粒大提试剂盒）。
5）4度保存，不可冷冻。避免反复或长时间开盖，避免脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用建议优化DNA和AFT Lip9000剂量以获得最佳转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，例如使用0.5 µg DNA和1-1.5 µL 转染试剂。通过调整AFT Lip9000转染试剂比例优化转染效率时，DNA(μg): AFT Lip9000 (μL)比值在1: 0.5-1: 5。
【使用方法】（以24孔板为例，其它参考表1）
一、细胞准备
贴壁细胞：转染前一天（12-24小时），胰酶消化细胞并计数，按照每孔2-8×105个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为80-100%。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500 µL生长培养基中加入4-10 × 105细胞。
注意：a、铺板时可使用抗生素，但转染时候切记移除抗生素。
b、高细胞密度仍具高转染效率，建议细胞密度大于90%。
二、转染复合物的配置：
1）使用50 μL无血清培养基（如DMEM或OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.5 μg DNA，涡旋混匀。
2）使用50 μL无血清培养基（如DMEM或OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.6-2.5 μL AFT Lip9000转染试剂。转染试剂稀释后室温孵育2-5 min（在30 min内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
注意：a、如果DMEM 作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5 min内同稀释的DNA混合。
b、转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度优化最佳使用量。
三、细胞转染：
1）混合稀释的DNA和稀释的AFT Lip9000（总体积100µL），轻轻混匀，并在室温孵育20 min。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。DNA-转染试剂复合物室温至少稳定保存5h。
2）将100 µL DNA-AFT Lip9000复合物滴加到24孔细胞板中（细胞板中培养基为400µL），轻轻晃动细胞板混匀。
注：如需无血清条件转染，加入复合物前将含血清培养基替换为无血清培养基即可。
3）37℃ 5% CO2培养箱培养18-48 h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。如需要，可在转染后4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染效率。
【转染体系的调整】
不同的细胞培养板，AFT Lip9000、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表1）。对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以，这样进一步减少转染时间。
表1不同培养容器转染试剂、核酸、培养基用量表
细胞板 | Shared reagents | DNA 转染 | RNAi 转染 | RNA 转染 | ||||
终体积 | 转染复合物 | DNA | 转染试剂 | RNA | 转染试剂 | RNA | 转染试剂 | |
96-well | 100 μL | 2×25 μL | 0.1 μg | 0.2-0.5 μL | 5 pmol | 0.25 μL | 100ng | 0.15-0.3μL |
24-well | 500 μL | 2×50 μL | 0.5 μg | 0.6-2.5μL | 20 pmol | 1.0 μL | 500ng | 0.75-1.5μL |
12-well | 1 mL | 2×100 μL | 1 μg | 2-4.5 μL | 40 pmol | 2.0 μL | 1000ng | 1.5-3μL |
6-well | 2 mL | 2×250 μL | 2-4 μg | 5-10 μL | 100 pmol | 5 μL | 2500 ng | 3.75-7.5μL |
60-mm | 5 mL | 2×0.5 mL | 4-8 μg | 10-20 μL | 200 pmol | 10 μL | 5000ng | 7-15μL |
10-cm | 15 mL | 2×1.5 mL | 12-24μg | 30-60 μL | 600 pmol | 30 μL | 15000ng | 21-45μL |
该表仅供参考，具体用量建议根据细胞类型及其它条件进行优化， DNA(μg) : AFT Lip9000 (μL)比值建议在1: 0.5-1: 5间优化。
