友情提醒：您可以用以前的qPCR配置体系、以前的qPCR程序，一切照旧！
【储存条件】 长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。
【产品简介】
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR的专用2×浓度预混液。利用HotStart Taq DNA Polymerase高温加热前，anti-Taq单克隆抗体与Taq酶结合，抑制Taq酶的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。Anti-Taq单克隆抗体在PCR反应第一循环的变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后的Taq Polymerase反应，大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。优化浓度的SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中SYBR Green I染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。
【产品组份】 HotStart Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、low ROX、反应缓冲液、稳定剂和增强剂。
【适用范围】
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。本产品适合需要Low ROX校正的仪器：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio 3 System，QuantStudio 5 System，QuantStudio 6 Flex System，QuantStudio 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
【所需试剂】
本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。
【操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系: | |
Template DNA | X* µl |
2X AFT Realtime PCR Super mix with Low Rox | 10 μl |
Primer 1 (10μM) | 0.5 µl |
Primer 2 (10μM) | 0.5 µl |
ddH2O补足至 | 20 µl |
建议的PCR条件： |
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95°C | 30-60 sec. |
35-40 cycles of: |
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95°C | 15 sec. |
55–65°C | 15 sec. |
72°C | 30-60 sec*. |
*一般情况下目标片段在300bp以下时，延伸时间30秒即可，但一部分仪器，为测定稳定的荧光，延伸时间需要大于30秒。扩增曲线散乱，或者各孔间差异较大时，请设定较长的延伸时间（45-60秒）。 | |
*:10~100 ng基因组 DNA ，或1~10 ng cDNA为参照 ，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。另外two Step RT PCR反应的 cDNA （RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10% 。
【注意事项】
1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2. 尽可能减少在光下的曝露时间，长时间的曝光可导致荧光信号强度的丧失。 本品不能用于杂交探针法
