AFT One-Step qRT-PCR kit (probe)（一步法探针法荧光定量试剂盒）

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【储存条件】 长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。

【产品简介】

AFT One-Step qRT-PCR Kit是采用探针法进行一步法实时荧光定量检测的专用试剂盒。本产品是基于高效的AFTScript II 反转录酶、抗体型Hotstart Taq DNA聚合酶配合优化的Buffer体系研制，在提高检测灵敏度的同时保证了扩增的特异性。使用本制品进行Real Time RT-PCR反应时以提取的RNA为模板，在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量检测，操作简单，并能有效防止污染。本产品为2x预混增强荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，根据不同荧光定量PCR仪选择使用）和水，使其工作浓度为1×，即可进行反应。具有快速简便、灵敏特异、稳定性好。

【产品组份】

AFT One Step Enzyme Mix                220 μl

2x AFT Taqman One Step qRT-PCR Buffer      1.1 ml

DEPC-ddH₂O                                1.1ml

【注意事项】

1. 实验过程中请注意避免RNase污染。

2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。

3. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用AFT Trigenet总RNA提取试剂制备高质量的RNA模板。

4. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70度加热5-10 min后再加入体系。

5. 制品只能使用特异性反转录引物，不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等进行反转录反应。

6. 当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。

7. 使用AFT One Step Enzyme Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。-20℃保存，使用后立即放回冰箱。

当两步法扩增不好时建议选择三步法。