【储存条件】 长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。
【产品简介】
AFT Magic Neo超保真DNA聚合酶在Magic超保真酶系列技术基础上,应用了AFT特制的<延伸增强剂>,抑制<PCR停滞现象>,不仅保持了Magic超保真酶的高保真性,更明显提高了对粗样品模板的扩增效率。AFT Magic Neo具有5’ 到3’ DNA 聚合酶活性和3’ 到5’ 的外切酶活性(即校读活性),能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度,约相当于普通Taq DNA Polymerase的4-6倍、Pfu DNA Polymerase的8-12倍。该酶合成能力很强,即使是复杂的模板,也能快速准确的完成反应,尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增,如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等,也可用于DNA片段的末端补平。使用AFT Magic Neo超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3’ 端突出碱基,不可直接用于TA克隆,可以用AFT特制的平末端TOPO克隆(货号AFT2006-01和AFT2007-01)。
【单位定义】 用大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74˚C、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。
【产品组份】
AFT Magic Neo High-Fidelity DNA Polymerase(1U/μl) 100 μl
2mM dNTPs 2x1ml
2× AFT Magic Neo PCR Buffer 3x1.7 ml
【质量控制】
以λ DNA为模板,能有效扩增20 kb的DNA片段;以基因组DNA为模板,能有效扩增单拷贝基因;无内切酶和外切酶污染。
【适用范围】
高保真扩增,长片段的快速扩增,如基因克隆、定点突变等;高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增;粗样品的直接扩增。
【操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系: | |
2× AFT Magic Neo PCR Buffer | 12.5 μl |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 µl |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 µl |
Template DNA* | 10-200ng |
2mM dNTPs | 2.5µl |
AFT Magic Neo High-Fidelity DNA Polymerase | 0.5µl |
ddH2O补足至 | 25 µl |
建议的PCR条件: |
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95°C | 2 min. |
32-36 cycles of: |
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95°C | 25 sec. |
53–64°C | 20-25 sec. |
72°C | 15-30sec./1 kb |
72°C | 5 min. |
保持 4°C forever |
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<*模板量:10~200 ng 基因组 DNA,10~30 ng 质粒,或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统,仅供参考。实际反应条件因模