产品名称 单位 货号
AFT BL21(DE3) Competent Cell 100μl×10支 AFT2084-01
【储存条件】 -80°C恒温保存，避免反复冻融，有效期六个月；干冰运输。
【产品简介】
BL21(DE3)大肠杆菌菌株是一种常用于质粒克隆的菌株，其基因型为F- lon ompT hsdSB (rB-,mB-) dcm gal rne131(DE3)。T7 RNA聚合酶基因的表达受控于l噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的重组表达。使用pUC19质粒检测，转化效率可达106 cfu/μg DNA。。
【产品组份】 AFT BL21(DE3) Competent Cell，pUC19（0.1 ng/μl）。
【使用方法】
按照无菌操作规程进行下列操作步骤：
1. 取感受态细胞置于冰浴中融化，待完全化冻后轻轻混匀。如需分装，可将融化的细胞悬液转移到无菌、预冷的离心管中，置于冰浴中备用。混匀、分装时动作应轻缓，以防细胞破裂。
2. 向 50~100μl 细胞悬液中加入目的 DNA，轻轻混匀，冰浴中放置 30 分钟。
注意：加入DNA 的体积以不超过感受态细胞体积的十分之一为宜。
3. 将离心管转移至42°C水浴中热激60~90秒，然后快速将离心管转移到冰浴中冷却2分钟。该过程不要摇动离心管。
4. 向离心管中加入500~900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37°C 200 rpm左右振荡培养45~60分钟，使菌体复苏并表达质粒上的抗生素抗性基因。
5. 根据实验要求，取适量转化后的菌液加到含相应抗生素的 LB 固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。待液体被完全吸收后，37℃倒置培养约 16小时。
注意：涂布量的选择应根据目的 DNA 的性质和浓度适当进行调整，通常可按下述方法涂布：
a. 目的质粒 DNA 在 1 ng 左右时，φ90 mm 平皿可涂布 100μl，φ55 mm 平皿可涂布 50μl；目的质粒浓度较高时，应相应减少涂布量。
b. 连接产物的转化菌液可通过4,000rpm 离心1~2分钟后，吸除大部分上清，用剩余的100~200μl上清重悬菌体，涂布于同一块琼脂平板上。
【注意事项】
1. 融化后的感受态细胞应及时进行转化，以免降低转化效率；融化后再次-80°C冻存的感受态细胞，其转化效率通常
降至 105 cfu/μg DNA 以下，仍可进行环形质粒的转化。
2. 整个操作过程要轻柔，避免移液枪吹吸。
3. 请使用传热性能好的薄壁试管或离心管，换用不同的试管或离心管时，应摸索热激时间，以获得最佳转化效率。
