产品名称 单位 货号
AFT Suspension Cell Special Transfection Reagent 0.5ml AFT2075-01
【储存条件】
4度保存，不可冷冻！
【产品简介】
AFT Suspension Cell Special Transfection Reagent AFT悬浮细胞专用转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。本产品以无菌的液体形式提供。
【注意事项】
1. 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释AFT Suspension Cell Special Transfection Reagent AFT悬浮细胞专用转染试剂（以下简称AFT转染试剂），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“悬浮敏转染试剂 -复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。
3. 转染时培养基中不能添加抗生素。
4. AFT转染试剂应该在4℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致AFT转染试剂氧化而影响转染效率。
5. 需优化DNA浓度和AFT转染试剂量以得到最大的转染效率。DNA和AFT转染试剂的比例，通常推荐是1:2 或1:3。
【操作案例】
推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）
最终转染体积：30 mL
转染细胞数目：3×107 cell（最终细胞密度：1×106 cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。
质粒DNA量：20-40 μg (通常30 μg)
转染试剂量：40-80 μL (通常60 μL). Use 2 μLAFT转染试剂每 1 μg 质粒DNA 用于转染。
【操作步骤】
使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无AFT转染试剂）。
注意：对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×107 细胞，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】
注意：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。
2. 按照以下方法配制AFT转染试剂-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL AFT转染试剂，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；
注意：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的AFT转染试剂，使其总体积为2mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-AFT转染试剂复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
注意：DNA-AFT转染试剂复合物室温至少可以稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2mL DNA-AFT转染试剂复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照，用2mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，8% CO2轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
